ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА,
комплекс методич. приёмов [приемов],
используемых в гистологии и патол. анатомии при изготовлении препаратов клеток,
тканей и органов для их последующего микроскопирования.
Приготовление постоянных гистол. препаратов в виде тонких срезов состоит из след.
осн. этапов: фиксации,
промывки,
обезвоживания и заливки кусочков,
приготовления срезов,
окрашивания,
обезвоживания и заключения. Фиксация — сохранение структуры и в нек-рой степени химич.
состава клеток и тканей путём [путем] быстрого воздействия на них химич.
или физич. агентов,
предотвращающих развитие посмертных изменений. Для фиксации используют р-ры формальдегида (4%-ные),
глютаральдегида (2—6%-ные),
фиксирующие смеси,
содержащие уксусную к-ту (жидкость Карнуа),
пикриновую к-ту (жидкость Буэна).
Один из лучших фиксаторов,
используемый в электронномикроскопич. исследованиях,— р-р четырёхокиси [четырехокиси] осмия.
При применении медленно проникающих фиксаторов (четырёхокись [четырехокись] осмия,
глютаральдегид) толщина кусочков тканей должна быть не более 2 мм.
Наилучшие результаты даёт [дает] относительно длительная фиксация при t 2—4 °С.
Обызвествлённые [Обызвествленные] ткани и структуры после фиксации подвергают декальцинации - обработке к-тами (азотной,
соляной и др.) или электрич. током. По окончании фиксации кусочки промывают в воде или спирте.
Дальнейшая обработка заключается в придании кусочкам однородной плотной консистенции,
что необходимо для получения тонких срезов. Это достигается либо путём [путем] замораживания кусочков, либо путём [путем] пропитывания — заливки их различными застывающими средами.
При изготовлении срезов на замораживающем микротоме (рис. 1) замораживание объектов достигается либо жидкой углекислотой,
либо с помощью термоэлектрич. охлаждающего столика ТОС. В микротоме-криостате МК-25 (рис.
2)
имеется камера с низкой темп-рой,
в к-рую заключён [заключен] микротом.
Из сред для заливки чаще применяют парафин и целлоидин.При заливке в парафин отмытую от фиксатора ткань обезвоживают (через спирты возрастающей крепости),
проводят через промежуточный растворитель (ксилол или хлороформ) и пропитывают парафином при t 55—56°С,
затем,
быстро охлаждая кусочки,
получают парафиновые блоки. При заливке в целлоидин промежуточным растворителем является спирт — эфир (1:1).
Для получения срезов с парафиновых и целлоидиновых блоков используют санный микротом (рис.
3). Окрашиванием срезов достигают контрастирования различных структур клеток и тканей,
по-разному воспринимающих те или иные красители.
Окрашивают срезы после удаления из них парафина (ксилолом),
проводки их через спирты понижающейся концентрации и промывания в воде.
Способы окрашивания препаратов многообразны. Из основных красителей чаще используют гематоксилин,
кармин,
сафранин,
метиловый зелёный [зеленый],
галлоцианин; из кислых — эозин, эритрозин,
кислый фуксин,
индигокармин и др. Спец. красители выделяют определённые [определенные] компоненты клеток и тканей,
напр,
слизь окрашивается муцикармином,
эластич. элементы — орсеином и др. Для приготовления препаратов нервной ткани применяют суправитальную окраску метиленовым синим и различные методы импрегнации — восстановление нервными структурами металлов,
гл. обр. серебра. После окраски хорошо промытые препараты обезвоживают в спиртах восходящей крепости (до 100%),
просветляют в смеси карболовой к-ты и ксилола (1:3),
выдерживают в 2 порциях ксилола и затем заключают в среду,
обеспечивающую сохранность структур объекта,
его окраску и прозрачность (рис. 4),
применяя
для этого канадский или пихтовый бальзам,
полистирол и др.
В случаях,когда препарат нельзя приводить в контакт с ксилолом,
спиртом,
используют для заключения водорастворимые среды (глицерин,
желатин или их смеси). Для изучения свежего материала (живых или переживающих объектов) изготовляют временные гистол.
препараты,
в к-рых объект заключают в физиол. р-ры. Большие возможности для прижизненного исследования клеток даёт [дает] метод культуры тканей.
См. также Микроскопическая техника,
Микроскопия.
Лит.: Ромейс Б.,
Микроскопическая техника,
пер. с нем.,
М.,
1954; Роскин Г. И.,
Левинсон Л. Б.,
Микроскопическая техника,
3 изд.,
М.,
1957.