Энциклопедии, словари, справочники
 Энциклопедии, словари, справочники (поиск)   /   Инкубация яиц сельскохозяйственной птицы  Читатели спрашивают 
 
А Б В Г
Д Е Ж З
И К Л М
Н О П Р
С Т У Ф
Х Ц Ч Ш
Щ Э Ю Я

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИЗОЦИМА  в яичном белке и крови методом диффузии в агар. Для титрации отбирают чашки Петри примерно одинакового диаметра с плоским дном. В качестве питательной среды используют 3%-ный мясопептонный агар (МПА) с pH = 7,2, который наливают ровным слоем в 2,5-3,0 мм (в чашки Петри диаметром 90-95 мм наливают 15 мл МПА). Для получения слоя среды одинаковой толщины агар разливают в чашки Петри, помещённые [помещенные] на строго горизонтальной поверхности, и подсушивают в термостате при 37°С в течение 12-18 часов. После этого чашки могут быть использованы для титрации в течение 7-8 суток при условии хранения в холодильнике. Перед титрацией их размечают, указывают номера лунок на нижней стороне (дне). На крышке указывают дату разливки МПА, дату титрации, испытуемый материал (например, кровь курицы № 16) и другие необходимые сведения. Тест-микробом для определения концентрации лизоцима белка яиц является культура М. lysodeicticus, штамм 2665/43, селекционируемая по наибольшей чувствительности к лизоциму, выраженности антагонистических свойств к ряду других микробов и скорости роста. Тест-культуру для титрации поддерживают пересевами штрихом на мясопептонный агар не реже 1 раза в две недели, причём [причем] посев делают каждый раз не менее чем в две пробирки с косым агаром. После инкубации культуру на МПА помещают в холодильник, откуда её [ее] берут по мере надобности для пересевов при поддержании культуры или проведения титрации. Для получения фона нужной густоты при титрации лизоцима используют суточную бульонную культуру микрококка в разведении 1:100, которую вносят по 0,25 мл в каждую чашку Петри и тщательно распределяют по всей поверхности среды. После нанесения фона чашки оставляют при комнатной температуре на 30-40 минут для того, чтобы нанесённая [нанесенная] жидкость впиталась в агар, а тест-микробы плотно осели на поверхности среды. Нормальной для получения наиболее объективных результатов является густота тест-культуры на МПА после инкубации в чашках титрации, при которой происходит рост отдельных, густо и равномерно распределённых [распределенных] на поверхности агара колоний. Нормальная густота фона является фактором, во многом определяющим величину диаметров зон задержки роста при прочих равных условиях. При избыточной густоте фона (сливной рост) диаметр задержки значительно меньше, чем при нормальной. Изреженный рост культуры фона хотя и приводит к увеличению зон задержки роста, но учёт [учет] становится недостаточно достоверным. После того, как нанесена и просушена культура фона, в агарных пластинках делают лунки стерильной тонкостенной трубкой с внешним диаметром 10 мм. В зависимости от предлагаемой активности исследуемого материала в среде на дне чашки Петри можно разместить 4-10 лунок. Дно чашек размечают (линиями) на секторы соответственно количеству лунок, а лунки нумеруют. В каждую лунку вносят по 0,1 мл испытуемой жидкости. Большее количество жидкости вносить нельзя, так как она будет проливаться из лунок, особенно при наличии выпуклостей на дне чашки. Меньшее количество жидкости будет давать зоны значительно меньшего диаметра и также непригодно для титрации. После внесения в лунки испытуемой жидкости на крышке чашки Петри пишут дату титрации, затем их помещают в термостат при 37оС. Через 24 часа инкубации, когда рост культуры фона становится хорошо виден при прямом освещении или боковом проходящем свете на тёмном [темном] фоне, чашки вынимают из термостата и проводят учёт [учет] результатов титрации по наличию или отсутствию зон задержки роста тест-культуры. Обычный рост культуры фона непосредственно у лунки, в которую внесён [внесен] испытуемый материал, указывает либо на полное отсутствие в нём [нем] лизоцима, либо на то, что его концентрация недостаточна для задержки роста тест-культуры. Этот результат отмечают знаком «О», что указывает на отсутствие в исследуемом материале титруемых количеств лизоцима. Если рост тест-культуры около лунок значительно изрежен по сравнению с густотой культуры фона, находящейся в удалении от лунок, то такой результат указывает на очень низкую концентрацию лизоцима. Условно его обозначают ЗУР (зона угнетённого [угнетенного] роста). Если диаметр ЗУР более 14 мм, то отмечается его конкретная величина, если 1 мм и менее — результат обозначается как «следы». При наличии в испытуемой крови, сыворотке или белке яиц достаточных концентраций лизоцима вокруг соответствующих лунок видны кольцеобразные зоны задержки роста (ЗЗР), свободные от колоний тест-культуры. Степень активности лизоцима учитывают путём [путем] измерения диаметра круга ЗЗР в мм (титр лизоцима) или по площади зоны задержки (индекс лизоцима), которая вычисляется по формуле: Р2 - 52, где Р — радиус зоны задержки роста, мм; 5 — радиус лунки, мм. Индексы лизоцима при разных диаметрах зоны задержки роста (ДЗЗР) культуры приведены в таблице 112.

По данным первичного учёта [учета] судят о бактериостатической активности лизоцима крови. Для оценки бактерицидных свойств лизоцима чашки Петри после первичного учёта [учета] вновь помещают в термостат при 37оС до утра следующего дня, определяя затем диаметр оставшихся зон роста, а по нему — содержание лизоцима (табл. 113).

Активность лизоцима белка служит тестом для определения уровня естественной резистентности организма кур. Концентрацию лизоцима в белке яиц определяют при разведении его стерильной дистиллированной водой 1:1000, 1:10000, 1:100000 и 1:1000000. Уровень естественной резистентности кур оценивают по 5-балльной шкале (табл. 114).

Так, нормальным его можно считать, если ЗЗР культуры наблюдается во всех пробах белка, взятых для титрации (100%).


^ЗГЛ: КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИЗОЦИМА.