МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ НА ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ
(от латинского infectio — порча; заразный), для постановки
диагноза на инфекционные заболевания, вызываемые бактериями и грибами,
необходимо исследовать живые недоразвитые или погибшие эмбрионы. Если погибший
эмбрион остаётся [остается] на некоторое время в инкубаторе, то в нём [нем] начинает
размножаться гнилостная микрофлора, поэтому выделитъ возбудители инфекции,
вызвавшие его гибель, трудно. Исследуют эмбрионов сразу после гибели, а если
такой возможности нет, то отходы инкубации сохраняют в холодильнике. При
исследовании отходов инкубации используют бактериологические и серологические
методы, а также метод заражения эмбрионов и суточный молодняк. Для
бактериологических исследований используют эмбрионы, погибшие в разные сроки
развития. Вскрытие отходов инкубации для бактериологических исследований
проводят в боксе в стерильных условиях. При бактериологических высевах
дезинфицируют скорлупу над пламенем горелки. Острым концом ножниц пробивают
отверстие в области воздушной камеры, затем осторожно вырезают в боковом
участке яйца окно. Пастеровской пипеткой засасывают небольшое количество аллантоисной
жидкости и делают посевы на питательных средах. Яйцо вскрывают и эмбрион с
желточным мешком извлекают стерильным пинцетом в стерильную чашку Петри. Для
быстрого изготовления препаратов применяют и экспресс-методы. Каплю
аллантоисной, амниотической жидкости, крови или бульонной культуры берут
простерилизованной платиновой петлёй [петлей] или пастеровской пипеткой. Прежде чем
сделать мазок из органов, вначале прижигают раскалённым [раскаленным] шпателем участок тканей
и производят стерильным скальпелем разрез, а затем с разреза делают соскоб и
переносят его на стекло. Если мазки готовят из твёрдой [твердой] среды или содержимого
кишечника, желтка, то предварительно на стекло наносят каплю стерилизованной
воды, физиологического раствора или какой-либо жидкой питательной среды (мясо-пептонного
бульона), а затем уже частицы взятого материала эмульгируют в имеющейся капле и
размазывают по стеклу. Иногда после разреза стерильным скальпелем тканей
захватывают часть органа пинцетом и делают убывающий по плотности мазок на
предметном стекле. Мазки высушивают и фиксируют обычным способом, принятым в
микробиологии. Фиксированные мазки окрашивают различными методами в зависимости
от исследования на то или иное инфекционное заболевание. Для простой окраски
применяют спиртоводный раствор фуксина 1:10 (Прейфера), лефлеровскую
метиленовую синьку и сафранин. На фиксированный мазок наносят несколько капель
краски, затем её [ее] смывают дистиллированной водой, и мазок сушат между полосками
фильтрованной бумаги. Продолжительность окраски зависит от вида и качества
красящего раствора, степени восприимчивости к нему микроба и от толщины мазка.
Сложные методы окраски основаны на особенностях физико-химического строения
микробной клетки, сущность их заключается в воздействии на мазок двух красящих
веществ, из которых одно является основной краской, а другое — дополнительной.
Мазок после воздействия первой краски обесцвечивают, и только после этого
подвергают дополнительному окрашиванию. В качестве обесцвечивающих веществ
применяют кислоту, щёлочь [щелочь], спирт, ацетон и другие химические реагенты. Окраску
спор производят по методу Виртца в модификациях Саватеева, Шеффера и Фултона,
методом Пешкова, Мюллера, Клейна. Для жгутиков и других органоидов также
используют сложные методы окраски. Промывные воды после окраски сливают в
специальный сосуд с последующим обеззараживанием, отработанную фильтровальную
бумагу сжигают, а использованные мазки дезинфицируют. Бактериологические
исследования проводят, соблюдая стерильность, чтобы не занести посторонних
микробов. С этой целью проводят посевы из органов и тканей эмбрионов на ряд
питательных сред, в зависимости от предполагаемого вида инфекции. Иногда бывает
достаточно провести посевы на простые среды, чаще же требуется их набор с
углеводами, элективными средами и так далее. Все среды после посева помещают в
термостат для выращивания. Как правило, учёт [учет] полученных результатов производят
через сутки роста культуры в термостате, делают мазки с МПА и МПБ и отмечают
все изменения со средами. Обычно наблюдения ведут 7-10 суток. В случае необходимости
проводят посевы на другие питательные среды. Заражение яиц, эмбрионов и
лабораторных животных проводят общепринятыми методами. Серологический метод
диагностики аллантоисной жидкости часто осуществляется при вирусных
заболеваниях (болезни Ньюкасла, гриппе птиц, респираторном микоплазмозе и
других).
^ЗГЛ: МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ НА ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ.