Энциклопедии, словари, справочники
 Энциклопедии, словари, справочники (поиск)   /   Инкубация яиц сельскохозяйственной птицы  Читатели спрашивают 
 
А Б В Г
Д Е Ж З
И К Л М
Н О П Р
С Т У Ф
Х Ц Ч Ш
Щ Э Ю Я

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИЗОЦИМА ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ (от латинского turbidus — мутный и метрия), метод количественного химического анализа. Основан на измерении интенсивности света, прошедшего через суспензию, образованную частицами определяемого вещества в жидкой фазе. В качестве тесткультуры используется ацетоновый порошок Micrococcus lysodeicticus в виде суспензии в 0,06 М фосфатном буфере pH 6,2. Буфер готовится смешиванием 80 мл 0,06 М раствора двузамещённого [двузамещенного] фосфорнокислотного натрия. Буфер можно хранить в холодильнике при 4оС одну-две недели. Одновременно готовится стандартный раствор лизоцима. Для этого 10 мл кристаллического лизоцима растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Из этого раствора, содержащего 100 мкг лизоцима в 1 мл, путём [путем] дальнейшего разведения готовят рабочие растворы, необходимые для получения калибровочной кривой, например, 2, 4,6, 8, 10 мкг в 1 мл. Белок разводят в соотношении 1:1200 в 0,1 М растворе хлористого натрия. Рабочие растворы лизоцима и испытуемой пробы белка помещают по 1 мл в две пробирки (две параллельные пробы). В две контрольные пробирки вносят по 1 мл воды. Ацетоновый порошок субстрата суспендируют в 0,06 М фосфатном буфере pH 6,2 так, чтобы начальная оптическая плотность суспензии составляла 0,700 (14-15 мг бактериальных клеток на 100 мл буферного раствора). Взвесь стандартизируют на ФЭКе против буфера, используя зелёный [зеленый] светофильтр (длина волны 540 ммк), в кюветах с рабочей длиной 10 мм. После приготовления всех растворов в каждую пробирку добавляют 6 мл бактериальной суспензии с интервалом в 1 минуту. Сразу же измеряют оптическую плотность растворов в контрольных пробирках. Через 30 минут при комнатной температуре в той же последовательности измеряют оптическую плотность всех растворов. Отсчёт [Отсчет] показателей на ФЭКе проводится по красной шкале правого барабана. Результаты измерения экстинкции наносят на сетку графика, где по оси абсцисс отложена концентрация лизоцима (мкг на 1 мл), по оси ординат — экстинкция (от латинского extincio — гашение, ослабление светового потока, проходящего сквозь какую-либо среду).


^ЗГЛ: ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИЗОЦИМА ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.