ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИЗОЦИМА ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ (от латинского turbidus —
мутный и метрия), метод количественного химического анализа. Основан на
измерении интенсивности света, прошедшего через суспензию, образованную
частицами определяемого вещества в жидкой фазе. В качестве тесткультуры
используется ацетоновый порошок Micrococcus
lysodeicticus в виде суспензии в 0,06 М фосфатном
буфере pH 6,2. Буфер готовится смешиванием 80 мл 0,06 М раствора двузамещённого [двузамещенного]
фосфорнокислотного натрия. Буфер можно хранить в холодильнике при 4оС
одну-две недели. Одновременно готовится стандартный раствор лизоцима. Для этого
10 мл кристаллического лизоцима растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Из
этого раствора, содержащего 100 мкг лизоцима в 1 мл, путём [путем] дальнейшего
разведения готовят рабочие растворы, необходимые для получения калибровочной
кривой, например, 2, 4,6, 8, 10 мкг в 1 мл. Белок разводят в соотношении 1:1200
в 0,1 М растворе хлористого натрия. Рабочие растворы лизоцима и испытуемой
пробы белка помещают по 1 мл в две пробирки (две параллельные пробы). В две
контрольные пробирки вносят по 1 мл воды. Ацетоновый порошок субстрата
суспендируют в 0,06 М фосфатном буфере pH 6,2 так, чтобы начальная оптическая
плотность суспензии составляла 0,700 (14-15 мг бактериальных клеток на 100 мл
буферного раствора). Взвесь стандартизируют на ФЭКе против буфера, используя
зелёный [зеленый] светофильтр (длина волны 540 ммк), в кюветах с рабочей длиной 10 мм.
После приготовления всех растворов в каждую пробирку добавляют 6 мл
бактериальной суспензии с интервалом в 1 минуту. Сразу же измеряют оптическую
плотность растворов в контрольных пробирках. Через 30 минут при комнатной
температуре в той же последовательности измеряют оптическую плотность всех
растворов. Отсчёт [Отсчет] показателей на ФЭКе проводится по красной шкале правого
барабана. Результаты измерения экстинкции наносят на сетку графика, где по оси
абсцисс отложена концентрация лизоцима (мкг на 1 мл), по оси ординат —
экстинкция (от латинского extincio — гашение, ослабление светового потока,
проходящего сквозь какую-либо среду).
^ЗГЛ: ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИЗОЦИМА ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.