Как проехать Контакты 
Библиотека
Общие сведения
Вход для зарегистрированных читателей
База данных АГРОС
Библиотека-депозитарий ФАО
Издания
Выставки
Виртуальные выставки
Электронные библиотеки ЦНСХБ
Сельскохозяйственная Электронная Библиотека Знаний (СЭБиЗ)
Биографическая энциклопедия ученых-аграриев

ЦЭБС АПК
Сводный каталог библиотек АПК
Каталоги библиотек АПК
Обменный фонд
Электронная библиотека Сводного каталога
Ведомственный экземпляр НИУ

Услуги
Избирательное распространение информации
Доставка документов
Терминал удаленного доступа
Виртуальное библиографическое обслуживание
Форум читателей ЦНСХБ
Инструкции
Информационные услуги
Вы являетесь

посетителем
Рейтинг@Mail.ru Яндекс.Метрика
[Ввод запроса]

^ШХР: П 2647 2013 49(1)
^АВТ: Русенова Н.В.; Парванов П.; Станилова С.
^ЗГЛ: Метод мультиплексной ПЦР для быстрого обнаружения Paenibacillus larvae в гнилостной массе сот и колониях бактерий [Экспресс-диагностика американского гнильца пчел]
^ВЫХ: Прикл.биохимия и микробиология, 2013; Т.49,N 1. - С. 88-93
^ДАТ: 2013
^ПРМ: Рез. англ..-Библиогр.:с.92
+Реферат

^РЕФ: Разработан метод мультиплексной ПЦР (мПЦР) для экспресс-диагностики американского гнильца пчел - обнаружения Paenibacillus larvae в гнилостной массе (ГМ) из пчелиных сот, контаминированной различной микрофлорой. Исследовались 45 образцов ГМ, бактериальные культуры, выделенные из них, 4 штамма (ШТ) родственных видов бактерий - Brevibacillus laterosporus, Bacillus licheniformis, Bac. subtilis subsp. subtilis и Paenibacillus alvei, и в качестве положительного контроля - эталонный ШТ P. larvae NBIMCC 8478. ДНК из бактериальных колоний выделялась стандартным методом с использованием коммерческого набора DNA Bacterial Extraction Kit Prep Gem ("ZyGem", США). Выделение ДНК из ГМ пчелиных сот проводилось 2 способами: стандартным, когда ее образцы разводилась дистиллированной водой с дальнейшим нагреванием и центрифугированием, и модифицированным, с использованием вместо воды среды CASO ("Fluka", Швейцария), инкубированием 100 мкл каждого разведения в течение 1 ч при t +37° C на водяной бане и центрифугированием. Для проведения мПЦР были использованы 3 пары праймеров (ПР), специфичных к гену 16S рРНК и одна пара ПР для выявления гена-предшественника металлопротеиназы (Mlp) в различных комбинациях: 1-2/3-4; 3-4/5-6 и 3-4/7-8. Наилучшей комбинацией ПР оказалась 1-2/3-4 из-за отсутствия неспецифических продуктов ПЦР. Т.о., одновременная амплификация 2 разных генов оказалась лучшим вариантом для обнаружения P. larvae, поскольку недостаточное количество копий одного гена может слабо визуализироваться в 1%-ном агарозном геле и привести к ложноотрицательному результату. Разработанный модифицированный способ показал высокую чувствительность обнаружения ДНК - менее 15 нг/мкл. Комбинация ПР 1-2/3-4 приводила к образованию продуктов амплификации ДНК исключительно из родственных видов бактерий. Чувствительность стандартной ПЦР с электрофоретической детекцией была низкой по сравнению с мПЦР и составила 21,4% (90,5%) к одному амплифицированному гену, и 45,2% (100%) - к 2, при специфичности - 29% - к гену 16S рРНК и 40,5% (90,5%) - к гену Mlp соответственно. Разработанный метод мПЦР рекомендован к практическому применению при экспресс-диагностике американского гнильца пчел. Ил. 3. Табл. 2. Библ. 24.

^TRN: 1384821
^ВИД: Статья из журнала
^ЯЗК: Русский
+Индексирование



  назад   Главная страница ЦНСХБ  

Все права защищены 1998-2016 год ©Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Центральная научная сельскохозяйственная библиотека»